Svorio netekimas hopkinton ma. Dick ' sullivan aukso corral
Turinys
Vaizdo gavimo būdai ir agentai Insultas Anotacija Kraujagyslių nutekėjimas smegenyse yra pagrindinė komplikacija, susijusi su smegenų sužalojimais ir tam tikromis patologinėmis būklėmis, nes sutrinka kraujo-smegenų barjeras BBB. Norėdami patvirtinti mūsų metodo naudingumą kraujagyslių nutekėjimui, mes panaudojome žiurkių trombembolinio insulto modelį. Didelis mūsų metodo jautrumas gali suteikti naujų galimybių ištirti BBB nutekėjimą įvairiomis patologinėmis sąlygomis ir išbandyti įvairių terapinių strategijų, skirtų apsaugoti BBB, efektyvumą.
Jis atskiria cirkuliuojantį kraują nuo smegenų skysčio centrinėje nervų sistemoje CNS 2.
Tam tikri vaistai pvz. BBB sutrikimas yra sunki būklė, atsirandanti esant daugeliui patologinių ligų, tokių kaip smegenų augliai 9, smegenų sužalojimai 10, CNS infekcijos 11, neurologinės ligos 12, 13 ir epilepsija Insulto metu BBB suskaidymą sukelia išemijos-reperfuzijos trauma Kadangi BBB išsaugojimas yra labai svarbus daugeliu neurologinių sąlygų, reikalingas objektyvus, jautrus metodas BBB vientisumui įvertinti. Dažniausiai naudojamas metodas yra Evanso mėlynojo EB tyrimas 16, pagrįstas EB dažų gebėjimu prisijungti prie serumo albumino iškart po jo įvedimo į veną IV į kraują.
Kadangi serumo albuminas nekerta BBB normaliomis fiziologinėmis sąlygomis, EB dažų kaupimasis smegenų audinyje atliekamas spektrofotometriniu būdu, siekiant išanalizuoti kraujagyslių nutekėjimą Tačiau šis metodas reikalauja didelio audinių apdorojimo ir nėra pakankamai jautrus, svorio netekimas hopkinton ma būtų galima nustatyti nedidelio nutekėjimo požymius ar įvertinti bendrą kraujagyslių nutekėjimo mastą smegenyse.
EB dažai fluorescuoja su sužadinimo smailėmis esant ir nm, o emisijos smailė - nm. Norėdami patvirtinti optinio vaizdo metodo naudingumą kraujagyslių nutekėjimui, mes panaudojome žiurkių trombembolinio insulto modelį.
Rezultatai EB dažų brėžiniai optinio vaizdo ir ultravioletinių spindulių absorbcijos atžvilgiu Įrašyti ultravioletinių spindulių UV absorbcijos ir optinio signalo intensyvumai sekė tipiškomis sigmoidinėmis kreivėmis su padidintu EB dažų kiekiu; tačiau abu metodai parodė skirtingą aptikimo jautrumo, tiesinio diapazono ir plokščiakalnio ar nuosmukio laipsnį, toliau didėjant EB 1a pav.
Remdamiesi šiais duomenimis, mes nustatėme, kad mažiausias aptinkamas EB kiekis buvo ~ 0, 05 ng optiniu vaizdavimu, palyginti su ~ 62 ng UV spektrofotometrijos būdu. Nors optinio vaizdo gavimo metodas, kaip ir visi kiti analizės metodai, yra labai kofeinas ir svorio metimas ir linijinis plataus diapazono papildomi duomenys apie apatinį ir viršutinį EB diapazonąnorint gauti tikslius svorio netekimas hopkinton ma duomenis, gali reikėti naudoti tinkamą EB kiekį standartiniame paveiksle.
Filtravimo popieriaus diskai, naudojami EB brėžiniams sudaryti optiniu vaizdavimu, turėjo skirtingas spalvas šilumos žemėlapįatsižvelgiant į EB dažų kiekį 1b pav.
EB dažų pagal UV absorbciją diagrama 1c pav. Taigi, linijinis EB dažų diapazonas pagal UV absorbciją buvo žymiai didesnis nei optinio vaizdo 1b pav.
Dick ' sullivan aukso corral
Viršijant linijinį svorio netekimas hopkinton ma, optinis signalas mažėjo ir toliau didėjo EB, tuo tarpu UV sugertis buvo plato, kai pasiekė viršutinę prietaiso aptikimo ribą 1a pav. Optiniam signalui į filtrų diskus buvo dedami skirtingi EB dažų kiekiai. Diskų spalvos buvo skirtingos: raudona spalva pažymėta diske, į kurią įdėta daugiausia EB dažų, mėlyna - diske, į kurią įdėta mažiausia.
Visas dydis EB dažų nutekėjimo smegenyse žemėlapis po sužadinto insulto Kraujagyslių nutekėjimas dėl BBB skilimo atsiranda po išemijos-reperfuzijos sužalojimo po insulto. Taigi, mes patvirtinome optinio vaizdo efektyvumą, kad būtų galima nustatyti kraujagyslių nutekėjimą šiame modelyje.
Gyvūnų neurologinis balas per 3 valandas po insulto indukcijos buvo 6 skalėje nuo 1 iki 14 1—4, lengvas; 5—9, vidutinio sunkumo ir 10—14, sunkustai rodo, kad gyvūnai patyrė vidutinį insultą. Tai yra standartinis gyvūnų galvos smegenų insulto įvertinimo metodas, siekiant nustatyti smegenų pažeidimo laipsnį, ir yra gana dauginamas.
Nuotrauka, kurioje visos smegenys buvo surinktos 2 valandas po EB infuzijos 5 valandos po insulto indukcijosparodė šiek tiek mėlyną galvos smegenų insulto spalvos pakitimą dėl sušvirkšto EB dažo ekstravazacijos 2a pav. Tačiau tų pačių smegenų optinis vaizdas aiškiai parodė kraujagyslių nutekėjimo sritis, gautas skleidžiant optinius signalus iš EB, sukauptų infarktuose smegenyse 2b pav.
Kadangi prieš imant smegenis, gyvūnai buvo plačiai perfuzuojami fiziologiniu tirpalu, todėl vaizdo gavimo signalas atsiranda dėl smegenų audinyje lokalizuoto EB. Panašiai kaip spalvų kodai, matomi standartiniame diagramoje optiniu svorio netekimas hopkinton ma su EB kiekiu 1b pav. Atitinkamose smegenų skiltelėse buvo užfiksuotas panašus spalvų žymėjimas kaip svorio netekimas hopkinton ma smegenyse 2c pav.
Įprasti tų pačių smegenų pjūvių fotografiniai vaizdai rodė mėlyną EB spalvą, tačiau sunku atskirti mažo ar didelio EB nuotėkio sritis nuo šių vaizdų, nuo optinių vaizdų 2c pav. Rodyklė nurodo infarktą smegenų pusėje. Vietos, kuriose yra daugiau nuotėkio, yra raudonos, o tos, kuriose mažiau nuotėkio, - mėlynos. Kaip vidinis standartas buvo naudojamas filtravimo popieriaus diskas su 20 ng EB dažų.
Visas dydis Norėdami ištirti optinį vaizdą, kad būtų galima nustatyti kraujagyslių nutekėjimą ir kiekybiškai įvertinti EB, pirmiausia sukūrėme standartinius EB plotus smegenų audinyje optiniu vaizdavimu 3a pav.
Ir UV sugertimi 3b pav. Atliekant kraujagyslių nutekėjimą, standartiniuose apskaitos bareliuose naudojamas EB kiekis paprastai būna smegenyse. Tuo pačiu EB kiekiu UV absorbcija yra ~ 0, 01, tai yra apatinis spektrofotometro aptikimo jautrumas.
Ši koreliacija patvirtina, kad EB kiekį galima apskaičiuoti pagal optinio signalo intensyvumą. Toliau mes tai patvirtinome, analizuodami EB kiekį smegenyse su insultu abiem žemiau aprašytais metodais.
Bendras signalas buvo normalizuotas atsižvelgiant į kiekvieno disko bendrą pikselių plotą, kad būtų gautas signalo intensyvumas viename pikselyje, kuris tiesiogiai koreliuojamas su atitinkamo disko EB dydžiu. Apskritimai, pažymėti aukščiau esančiose smegenų skiltelėse 1—4, rodo skirtingus spalvų kodus, atsižvelgiant į kraujagyslių nutekėjimą.
Visas dydis Norėdami parodyti optinio riebalų nuostoliai atrakinta gavimo galimybes nustatyti kraujagyslių nutekėjimą, mes išanalizavome skirtingas vienos smegenų skilties sritis svorio netekimas hopkinton ma pav.
Kiekybiškai įvertinus EB kiekį pagal optinį standartinį grafiką 3a pav. Pavyzdžiui, smegenų pjūvis, atspindintis 4 sritį pilkaatitiko 4, 6 ng EB sumos, o 1 sritis raudona atitiko 23, 3 ng EB sumos.
Visai smegenų daliai EB buvo 63, 5 ng. Tai pirmiausia buvo apskaičiuota suskaičiavus viso smegenų pjūvio signalą į pikselį. Ekvivalentiškam EB kiekiui nustatyti buvo naudojamas standartinis optinio vaizdo grafikas 3a pav.
Atskirame eksperimente mes analizavome EB dažus visose smegenyse tiek optiniu, tiek UV sugerties metodais. Atlikus optinį vaizdą, bendras EB kiekis visuose smegenų pjūviuose buvo nustatytas UV absorbcija. Norint apskaičiuoti bendrą EB kiekį naudojant optinį vaizdą, kumuliacinis visų smegenų pjūvių signalas buvo normalizuotas pagal pikselio plotą.
Taikant standartinį svorio netekimas hopkinton ma optiniam vaizdavimui, EB kiekis visose smegenyse buvo ng, tuo tarpu, nustatytas naudojant UV absorbciją, buvo ng. Pirmiau pateikti duomenys patvirtina kiekybinį optinio vaizdo pobūdį.
Taigi EB dydį įmanoma nustatyti pagal optinio signalo intensyvumą smegenyse, tiriamoje srityje arba visose smegenyse. Audinių plazminogeno aktyvatoriaus poveikis kraujagyslių nutekėjimui smegenyse Šiuo metu vienintelis JAV maisto ir vaistų administracijos numesti svorio milton svorio netekimas hopkinton ma gydymas yra audinių plazminogeno aktyvatoriaus t-PA - fermento, kuris tirpina krešulius, kad būtų atkurtas kraujo tekėjimas į išeminį audinį, tačiau žinomas, kad t-PA padidina BBB nutekėjimą.
Mes ištyrėme t-PA poveikį kraujagyslių nutekėjimui normaliems gyvūnams, tada gyvūnams, kuriems buvo sukeltas insultas, kad suprastume, kokią žalą t-PA daro svorio netekimas hopkinton ma sąlygomis.
Neseniai atliktais tyrimais įrodyta, kad t-PA vartojimas per intraarotinę arteriją yra efektyvesnis atkuriant kraujo srautą išeminiame audinyje ir paspartinant atsigavimą nei injekcija į veną 19, Taigi mes išbandėme abu t-PA vartojimo būdus ir jo poveikį kraujagyslių nutekėjimui.
Kontroliniame eksperimente EB dažai buvo švirkščiami nesukeliant insulto ar netaikant t-PA, o gyvūnams nebuvo atlikta jokia operacija, išskyrus tą, kuri reikalinga uodegos venų injekcijai.
Ši kontrolė neparodė jokio reikšmingo EB dažų signalo, išskyrus tas smegenų sritis, kuriose nėra BBB, pvz. Visas smegenų vaizdas parodė EB dažų pėdsakus tik virš viršutinio sagitalinio ir skersinio sinusų; likusios smegenys rodė tik nereikšmingus signalus 4a pav. Šio eksperimento duomenys buvo naudojami palyginimui ateityje ir BBB vientisumui patikrinti skirtingomis eksperimento sąlygomis. Gyvūnų, kuriems buvo atlikta fiktyvi operacija, sukelianti insultą vietoje miego arterijos įšvirkštas tik fiziologinis tirpalas, o ne krešulysreikšmingų skirtumų, palyginti su aukščiau išvardytomis kontrolinėmis medžiagomis, nebuvo 4b pav.
Įdomu tai, kad kai per miego arteriją buvo suleista ta pati t-PA dozė, nuskaityti smegenų skiltelių vaizdai parodė EB spalvą, kuri buvo didesnė dešiniajame pusrutulyje nei kairiajame 4d pav. Gyvūnų, gavusių t-PA per miego arteriją, optiniai visų smegenų ir pjūvių atvaizdai parodė EB dažų nutekėjimą svorio netekimas problemos šonus, kai mozaikos spalvos plotas buvo nuo raudonos iki mėlynos 4d, e pav.
Kiekybiškai įvertinus signalus iš visų smegenų pjūvių, nustatyta, kad t-PA skyrimas sukelia tolesnį kraujagyslių nutekėjimą, o poveikis priklauso nuo vartojimo būdo ir dozės 4f pav. Naudodami optinį standartinį EB grafiką, galime apskaičiuoti EB nuotėkio kiekį visose smegenyse iš kaupiamojo signalo intensyvumo iš visų smegenų pjūvių, kaip aptarta aukščiau.
Optinis vaizdas kraujo ir smegenų barjero nuotėkio žemėlapiui nustatyti | mokslinės ataskaitos
Tai, kad gyvūnų, gavusių t-PA, smegenys rodė didesnį signalo intensyvumą nei tų, kurie neturėjo, rodo, kad EB nutekėjimą lemia tik t-PA, o ne chirurginė procedūra. Normaliems gyvūnams t-PA buvo švirkščiama į veną per uodegą arba intraarteriškai per miego arteriją. Kaupiamasis svorio netekimas hopkinton ma smegenų pjūvių signalas buvo normalizuotas iki pikselių srities.
Visas dydis Gyvūnams, patyrusiems insultą, pastebimas svorio netekimas hopkinton ma didesnis kraujagyslių nutekėjimas nei normaliems gyvūnams, o infarkto srities šerdyje pastebimas didelis intensyvumas 5a pav. Palyginus normalių gyvūnų be insulto indukcijosgavusių tą pačią svorio netekimas hopkinton ma dozę, signalus, akivaizdu, kad t-PA skyrimas insulto sąlygomis dar labiau padidina kraujagyslių nutekėjimą 4d pav.
Pateikti duomenys yra kaupiamasis visų smegenų pjūvių signalas, normalizuotas iki pikselių srities. Filtravimo popieriaus diskas, į kurį įdėta 20 ng Svorio netekimas hopkinton ma dažų, kaip vidinis standartas.
Šis gebėjimas gali būti kritinis, norint suprasti, kuri smegenų dalis yra labiausiai paveikta. Nors ultravioletinės absorbcijos metodas parodė platesnį EB kiekio tiesinį diapazoną, nei optinio vaizdo metodo 1 pav. Remiantis optinio vaizdo analize, mūsų rezultatai rodo, kad intrakarotidinis t-PA skyrimas sukelia reikšmingą kraujagyslių nutekėjimą net normaliems gyvūnams 4 pav.
Taigi optinis vaizdavimas gali būti labai naudingas eksperimentiniams gyvūnų modelių tyrimams, siekiant įvertinti BBB vientisumą įvairiomis ligos sąlygomis ir išbandyti įvairių terapinių metodų efektyvumą siekiant apsaugoti BBB.
Kita naudinga optinio vaizdo programinės įrangos savybė yra jos gebėjimas palyginti skirtingų vaizdų iš skirtingų protokolų analizę, net jei tie eksperimentai buvo atlikti atskirai. Be to, galima tiesiogiai apskaičiuoti Svorio netekimas hopkinton ma kiekį tam tikrame smegenų plote arba smegenų pjūvyje, arba visose smegenyse, suskaičiavus optinio signalo intensyvumą viename taške ir naudojant standartinį grafiką, kuris yra tiesiogiai susijęs su EB dydžiu.
Pastaruoju metu optinis vaizdavimas susidomėjo histologine analize, nes jis gali suteikti bendrą vaizdą apie pokyčius, atsirandančius organe, taip pat apie pokyčius konkrečiose dominančiose srityse.
Bahmani ir kt. Neseniai Wunder ir kt. Šie metodai yra nepakankamai jautrūs arba reikalauja naudoti brangius prietaisus. Pavyzdžiui, gadolinio dietilengliamino pentaceto rūgšties nuotėkis per pažeistą BBB matuojamas kiekybiškai, naudojant dinaminio magnetinio rezonanso svorio netekimas hopkinton ma MRT.
MRT pranašumai yra tai, kad jis yra neinvazinis ir gali būti atliekamas pakartotinis nuskaitymas, o tai labai naudinga klinikinėje aplinkoje, tačiau atliekant tyrimus su gyvūnais MRT gali būti brangus BBB pralaidumui stebėti taip pat buvo naudojami fluoresceino izotiocianatu pažymėti albuminai 25 arba dažais užpildyti dekstranai arba polimerinės nanodalelės NP Klohs ir kt.
Kiti šių metodų trūkumai apima didelę reikiamą pažymėto albumino dozę arba būtinybę užkirsti kelią įšvirkštų NP eksploatavimui, kad jie liktų kraujotakoje pakankamai ilgi, kad pakankamai išsiskirtų pro nesandarius smegenų kraujagysles.
Radiotraceriams, naudojamiems klinikiniam BBB pažeidimo vaizdavimui, reikalingas vaizdavimas atliekant vieno fotono emisijos kompiuterinę tomografiją. Tyrimams pasirinkome insulto modelį, nes svorio netekimas hopkinton ma patofiziologinis pokytis, susijęs su išeminiu insultu, yra BBB sutrikimas Be to, kad EB dažai yra naudojami insulto, smegenų auglių ir trauminių smegenų traumų atvejais, jie nebuvo išsamiai ištirti, norint patikrinti BBB vientisumą.
Šis tyrimų trūkumas gali kilti dėl mažo jautrumo EB dažų aptikimui, naudojant įprastus metodus, vizualiai stebint nuskaitytus vaizdus arba analizuojant dažų kiekį naudojant UV spektrofotometriją.
Be to, tam tikri biocheminiai ir fiziologiniai pokyčiai, tokie kaip padidėjęs uždegiminių citokinų kiekis, pavyzdžiui, išsėtine skleroze 29, arba hipoksijos sukeliamas svorio netekimas hopkinton ma, akvaporinas-4 arba matricos metaloproteinazės-9, esant kitoms neurologinėms sąlygoms, gali sukelti BBB sutrikimą ir dėl to kraujagyslių nutekėjimą
